ПРИМЕНЕНИЕ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ ВЫСОКОГО ДАВЛЕНИЯ В НЕЙРОХИРУРГИИ

Ю.В.Воробьев, В.Д.Тенедиева, В.А.Крымский, А.П.Соломонов, И.Е.Трубина

НИИ нейрохирургии им. акад. Н.Н.Бурденко РАМН,
Москва, Россия

Определение содержания и динамики катехоламинов (КА) в плазме крови, спинномозговой жидкости (СМЖ) и в моче имеет огромное значение для диагностики и лечения больных в нейрохирургической клинике. Это и выявление гормональноактивных опухолей (параганглиом), и мониторинг гормонального статуса организма при различной нейрохирургической патологии (опухоли мозга, тяжелая черепно-мозговая травма (тЧМТ), восстановление психических функций мозга и т.д.) как до операции, так и в послеоперационном периоде с целью коррекции нейрогормональных функций. Кроме того, очевидна необходимость получения информации об уровнях адреналина, норадреналина и дофамина для реаниматологов, и в том числе, для нейрореаниматолов в связи с применением препаратов – антогонистов дофамина (Л-Допа, Допмина и т.п.) как кардиотоников с целью поддержания стабильной гемодинамики.

Однако, методы определения катехоламинов в биологических жидкостях остаются достаточно сложными и трудоемкими, несмотря на то, что исторически КА были одними из первых биологически активных веществ, вместе с кортикостероидами, для которых были созданы флюоресцентные методы их определения. Последние включали колоночную хроматографию, экстракцию с последующей детекцией на флюориметре фирмы “Хитачи”.

В последние годы предпочтение отдается определению КА методами жидкостной хроматографии высокого давления или высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). При этом, для клинических целей появились стандартные наборы для определения КА как в крови, так и в моче, например, фирм “BIO-RAD” (США), “БИОХРОМ” (Россия).

В наших исследованиях мы используем хроматограф “Acclaim” фирмы “BIO-RAD” (США) с электрохимическим детектором, специальной программой, позволяющей устанавливать режим хроматографии и получать хроматограммы на мониторе с последующей распечаткой результатов, а также указанные выше стандартные наборы, включающие все необходимые реактивы (смесь стандартов, внутренний стандарт для контроля, жидкие фазы). Причем, при использовании наборов фирмы “BIO-RAD” разделение КА в пробах плазмы крови или мочи происходит на аналитических колонках в изократическом режиме в течение 15 мин. В соответствие с времененм удерживания порядок выхода компонентов определяемой пробы с аналитической колонки следующий: адреналин, норадреналин, дофамин и внутренний стандарт. В процессе ежедневных исследований вводятся контрольные пробы смеси стандартов (контроль времени удерживания и стабильности аналитических условий).

Нами проведено статистически значимое число исследований с применением этих наборов, получены хорошие результаты у практически здоровых людей, у больных с гормонально активными опухолями коры надпочечников (феохромацитомы), при параганлиомах. В нейрохирургической практике отмечены нарушения содержания адреналина, норадреналина и дофамина у больных с аденомами гипофиза и краниофарингиомами. Однако, при проведении обследований у нейрореанимационных больных (с субарахноидальными кровоизлияниями, с тЧМТ; больных, оперированных по поводу опухолей мозга) мы столкнулись со значительными трудностями, заключавшимися в невозможности получения четких индивидуальных пиков КА на хроматограммах. В большинстве случаев разделение вообще не представлялось возможным из-за того, что пик дофамина “перекрывал” все остальные и, в том числе, внутренний стандарт, по которому рассчитывается содержание каждого пика. Как правило, эта категория больных находится на экзогенных инфузиях кардиотонических доз допмина. Поэтому, скорее всего, именно в этом состоит причина невозможности проведения анализа или возможен “урезанный” вариант, например, получение одного компонента или двух из трех.

Примененные нами меры (разведение проб крови; взятие крови у больных, которым вводились минимально терапевтически эффективные дозы допмина; исследования крови с учетом периода очищения вводимого допмина) к успеху не привели. Тем не менее, проблема остается, так как в нейрореаниматологии особенно важно – проведение мониторинга КА на фоне кардиотонической терапии.

С учетом вышесказанного, а также из-за высокой стоимости импортных наборов мы попытались применить разработанные отечественной фирмой “Биохром” наборы реактивов “Катехолпром -П” (для определения КА в плазме) и “Катехолпром -М” (для определения их в моче) на нашем оборудовании. Вместо аналитических колонок были применениы обращенно-фазовые. При этом были изменены время удерживания и порядок выхода пиков исследуемых КА на хроматограммах: норадреналин, адреналин, внутренний стандарт и дофамин. Таким образом, дофамин – последний компонент разделения исследуемой пробы, что дает надежду освободиться от нежелательного влияния больших концентраций дофамина (или его терапевтических аналогов) на разделение в исследуемых пробах при определении катехоламинов.

Однако, проведенные нами предварительные исследования показали, что изменения аналитической системы, предпринятые нами, улучшили качество разделения, но полностью не решили проблему. Таким образом, остаются актуальной проблемой методические особенности определения катехоламинов с помощью методов ВЭЖХ в условиях реанимации и интенсивной терапии у больных, которым требуется проведение кардиотонической терапии, включающей агонисты дофамина и Л-Допа.

Содержание конференции | Секция5