В.А.Исаченков, О.П.Шин
НПЦ медицинской биотехнологии Минздрава России, г.Москва
В современной лабораторной медицине все большее развитие получает направление по созданию бесприборных технологий определения биологически активных веществ с целью максимального приближения анализа к потребителю. Использование простых аналитических систем дает возможность вынести анализ за стены специализированных лабораторий в отдаленный медпункт, к постели больного, к месту катастрофы. Сведение же технических процедур до минимума позволяет осуществлять анализы медперсоналу любой квалификации и даже самим пациентам ( "домашние" тесты на беременность, глюкозу, половые инфекции). Нами разработана новая диффузионная тест-система для определения веществ-метаболитов в биохимической диагностике, основанная на обнаруженном нами феномене - способности ряда окислительно-восстановительных ферментов синтезировать цвет из реактивов для цветной фотографии. Нам удалось активировать стадию окисления проявителя не с помощью серебра, как в фотографии, а с помощью фермента пероксидазы - основного маркера в иммуноферментном анализе. Используя пероксидазу хрена и реактивы цветной фотохимии (проявитель и цветообразующие компоненты) был осуществлен синтез трех основных цветов: голубого, пурпурного и желтого. Это явление было названо -энзимография.
Тест-система формируется в стандартных 12-ти или 24 -луночных планшетах или чашке Петри. Матрицей служит агарозный гель, содержащий ферменты, окисляющие соответствующий метаболит, пероксидазу, проявитель, цветообразующий компонент (или хромоген). Операции по выполнению анализа сведены до минимума и сводятся лишь к внесению в предварительно пробитые в геле лунки исследуемого материала - сыворотки крови, цельной крови или мочи. После диффузии образца в гель и взаимодействия с реактивами появляется цветная радиальная зона. Площадь этой зоны дает результат анализа, так как пропорциональна концентрации определяемого вещества. Поскольку образующийся краситель нерастворим, граница круга четко очерчена и не распространяется дальше. Реакция останавливается сама и время ее протекания от 15 до 30 мин в зависимости от содержания аналита в пробе. Процесс не требует термостатирования. Метод по аналитическим показателям ( чувствительность, специфичность, коэффициенты вариации) не уступает традиционному биохимическому или иммуноферментному анализам, т.е. является количественным экспресс - методом.
Область применения созданной тест-системы - медицинская диагностика и индивидуальный самоконтроль здоровья. Энзимографическим методом можно определять любые метаболиты, при анализе которых терминальной стадией является пероксидазная реакция. Показана эффективность метода для определения следующих веществ: глюкоза, молочная кислота, гемоглобин, альбумин, холестерин, триглицериды. Энзимографический экспресс-анализ особенно хорош для применения в полевых условиях, в военной медицине, в санитарно- эпидемиологической службе, при авариях, катастрофах. Представляется обоснованным создание комплексного диагностикума в планшете с использованием цветообразующих компонентов фотохимии разного цвета на несколько жизненно важных - показателей.